Immunohistochemical evidence of melatonin protection on lung tissue during chemotherapy / Evidencia inmunohistoquímica de la protección de la melatonina en el tejido pulmonar durante la quimioterapia

SUMMARY: The present study investigated the possible protective effects of melatonin on Bleomycin, Cisplatin and etoposide (BEP) chemotherapy regimens using immunohistochemistry. Forty male Wistar rats were divided into four groups of ten as; group 1 as untreated control; group 2 as BEP group which received the three cycles of 21 days' regimen each of 0.5¥ dose levels ofBEP (bleomycin 0.75 mg/kg, etoposide 7.5 mg/kg and cisplatin 1.5 mg/kg). Rats in the group 3 (MEL group) received 10 mg/kg/day melatonin once daily. Group 4 received the melatonin (30 min before the BEP injections) and BEP as in groups 2. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) staining was used to detect cell proliferation and caspase-3, caspase-9 and Caspase-8 were detected to investigate apoptosis. PCNA immunostaining in alveolar epithelium, alveolar macrophages and bronchus was weak to moderate in BEP group. However, diffuse and strong caspase immunoreactions for caspase-3, caspase 8- and caspase-9 were detected in the bronchioles epithelium, vascular endothelium, alveolar luminal macrophages in the BEP group. PCNA and caspase immunoreactivities in MEL and Mel + BEP groups were close to the control one. The surface are in the BEP group was significantly reduced as compared to the control one ((P0.05). It can be concluded that BEP regimen can affects negatively on lung tissue and melatonin inhibits lung tissue injuries during BEP chemotherapy.

El presente estudio investigó los posibles efectos protectores de la melatonina en los regímenes de quimioterapia con bleomicina, etopósido y cisplatino (BEP) mediante inmunohistoquímica. Cuarenta ratas Wistar macho se dividieron en cuatro grupos de diez: grupo 1, control sin tratar; grupo 2, quimioterapia con una dosis de 0,5x de BEP (0,75 mg/kg de bleomicina, 7,5 mg/ kg de etopósido y 1,5 mg/kg de cisplatino) con tres ciclos de 21 días cada uno. Las ratas del grupo 3 (grupo MEL) recibieron 10 mg/kg/día de melatonina una vez al día. El grupo 4 (Mel + BEP) recibió melatonina (30 minutos antes de las inyecciones de BEP) y BEP, como en los grupos 2. Se usó la tinción del antígeno nuclear de células en proliferación (PCNA) para detectar la proliferación celular y, caspasa- 3, caspasa-9 y caspasa-8 para investigar apoptosis. La inmunotinción de PCNA en el epitelio alveolar, los macrófagos alveolares y los bronquios varió de débil a moderada en el grupo BEP. Sin embargo, se detectaron inmunorreacciones difusas y fuertes para caspasa-3, caspasa 8- y caspasa-9 en el epitelio de los bronquiolos, endotelio vascular y macrófagos luminales alveolares. Las inmunorreactividades de PCNA y caspasa en los grupos MEL y Mel + BEP fueron similares a las del control. El área de superficie en el grupo BEP se redujo significativamente en comparación con el control (P0,05). Se puede concluir que la quimioterapia con BEP puede afectar negativamente al tejido pulmonar y la melatonina inhibe las lesiones durante la quimioterapia.

Adult Rat Liver After Subchronic Acrylamide Treatment: Histological, Stereological and Biochemical Study

SUMMARY: Acrylamide (AA) is a widely used chemical and an important monomer in various industrial and laboratory processes. In addition, AA is formed during processing of starchy food at high temperature. The aim of our study was to examine effects of subchronic AA treatment on adult rat liver using histological, stereological and biochemical methods. Adult male Wistar rats were treated with AA at doses of 25 mg/kg b.w. and 50 mg/kg b.w. for three weeks. Stereological analysis showed decrease of volume density of hepatocyte cytoplasm, and increase of volume density of hepatocyte nuclei and nucleocytoplasmic ratio in AA50mg group. Immunohistochemical analysis of the liver sections showed that treatment with AA50mg increase the percentage of PCNA positive cells, while the percentage of caspase 3 positive cells was not affected by AA. PAS-staining showed that glycogen content in hepatocytes was not affected by AA. Serological examination revealed increase of lipid peroxidation in AA50mg group, while total protein concentration, protein thiol group level, as well as, paraoxonase 1 activity were not changed in AA-exposed animals. Stereological and immunohistochemical analyses of adult liver sections suggest increase of proliferation in AA50mg group, while increase of lipid peroxidation in serum of AA50mg group indicates oxidative stress induction.

La acrilamida (AA) es un químico ampliamente utilizado y un monómero importante en varios procesos industriales y de laboratorio. Además, la AA se forma durante el procesamiento de alimentos ricos en almidón a altas temperaturas. El objetivo de nuestro estudio fue examinar los efectos del tratamiento con AA subcrónica en el hígado de rata adulta utilizando métodos histológicos, estereológicos y bioquímicos. Se trataron ratas Wistar macho adultas con AA a dosis de 25 mg/kg p.v. y 50 mg/kg de peso corporal por tres semanas. El análisis estereológico mostró una disminución de la densidad del volumen del citoplasma de los hepatocitos y un aumento de la densidad del volumen de los núcleos de los hepatocitos y la relación nucleocitoplasmática en el grupo de 50 mg de AA. El análisis inmunohistoquímico de las secciones de hígado mostró que el tratamiento con 50 mg de AA aumentó el porcentaje de células positivas para PCNA, mientras que el porcentaje de células positivas para caspasa 3 no se vio afectado por AA. La tinción con PAS mostró que el contenido de glucógeno en los hepatocitos no se vio afectado por AA. El examen serológico reveló un aumento de la peroxidación de lípidos en el grupo de 50 mg de AA, mientras que la concentración de proteína total, el nivel del grupo tiol de proteína y la actividad de paraoxonasa 1 no cambiaron en los animales expuestos a AA. Los análisis estereológicos e inmunohistoquímicos de secciones de hígado adulto sugieren un aumento de la proliferación en el grupo AA50 mg, mientras que el aumento de la peroxidación lipídica en suero del grupo AA50 mg indica inducción de estrés oxidativo.

The morphological challenge in determining nuclear size and shape in anatomopathological neoplasia analysis / El desafío morfológico en la determinación del tamaño y forma nuclear en el análisis anatomopatológico de neoplasias

SUMMARY: From 1984 stereology was added to unbiased methods and procedures, i.e., counts became more reliable studying morphological images in a random and uniform isotropic way. Therefore, the orientation and sectioning methods adapted to stereological quantification are essential. A critical quantitative subject in practical pathology concerns diagnosing and classifying neoplasias. Pathologists evaluated different types of tumors by determining the nuclear roundness factor (NRF). NRF is calculated by the ratio between the nuclear radius obtained from the area and the perimeter. However, NRF is biased data because it depends on the sectioning orientation, nuclei shape, and section thickness. The stereology proposed an unbiased alternative to assess the nucleus from tumor cells, counteracting NRF quantitatively. Therefore, the volume-weighted mean nuclear volume has been used to prognostic tumors in several organs. In urology, this was used, for example, to study primary carcinoma of the bladder, renal and prostatic carcinomas.

RESUMEN: A partir de 1984 se agregó la estereología a los métodos y procedimientos sin distorción, es decir, los conteos se volvieron más confiables al estudiar imágenes morfológicas de forma aleatoria e isotrópica uniforme. Por tanto, los métodos de orientación y seccionamiento adaptados a la cuantificación estereológica son fundamentales. Un tema cuantitativo crítico en la patología práctica se refiere al diagnóstico y clasificación de las neoplasias. Los patólogos evaluaron diferentes tipos de tumores determinando el factor de redondez nuclear (NRF). NRF se calcula por la relación entre el radio nuclear obtenido del área y el perímetro. Sin embargo, NRF son datos distorsionados debido a que dependen de la orientación de la sección, la forma de los núcleos y el grosor de la sección. La estereología propuso una alternativa imparcial para evaluar el núcleo de las células tumorales, contrarrestando cuantitativamente el NRF. Por lo tanto, el volumen nuclear medio ponderado se ha utilizado para pronosticar tumores en varios órganos. En urología, esto se utilizó, por ejemplo, para estudiar el carcinoma primario de vejiga, carcinomas renales y prostáticos.

Application of stereology in liver volume measurements using computed tomography scan / Aplicación de la estereología en mediciones de volumen hepático mediante tomografía computarizada

SUMMARY: The application of stereology in hepatobiliary conditions is essential in liver volume estimation. Computerized topographic scan with contrast is a reliable method in liver scanning for precise boundaries demarcation. Liver volumetry varies in relation to different factors. Reports showed a correlation of liver volume with sex and body mass index. Steady relation between age and ethnicity is not established. This study aimed to design a protocol for liver volume measurement and apply it in the estimation of volume among the Sudanese population use stereology. Recruitment of the study population was obtained in the royal scan clinic in Khartoum by making an announcement for participation in the study. Patients with a history of hepatobiliary diseases were excluded. CT abdomen with contrast was obtained in DICOM format and transferred to computer-based software for image analysis. A protocol was designed and validated and then applied in volume estimation using software MRIcro for image display, ImageJ for volume estimation, and Onis 2.6 as image viewer. 300 apparently healthy volunteers were recruited. The protocol reliability result was 0.805. Absolute mean liver volume was 3261.32 ± 1365.313 cm3. High liver volume among females was detected than among males. A positive correlation was detected between volume and body mass index (p-value 0.001) regardless of sex. Relation with age showed a rough steady rise till the age of 50 years then it started to decline steadily. The relationship was detected in liver volume with sex and body mass index. More studies are needed to investigate the relationship between ethnicity and age groups.

RESUMEN: La aplicación de la estereología en condiciones hepatobiliares es fundamental en la estimación del volumen hepático. El escaneo topográfico computarizado con contraste es un método confiable en el escaneo del hígado para la demarcación precisa de sus límites. La volumetría hepática varía en función de diferentes factores. Los informes mostraron una correlación del volumen del hígado con el sexo y el índice de masa corporal. No se establece una relación estable entre la edad y la etnia. Este estudio tuvo como objetivo diseñar un protocolo para la medición del volumen hepático de la población sudanesa usando la estereología. El reclutamiento de la población de estudio fue realizado en la clínica de exploración real en Jartum mediante un anuncio de participación. Se excluyeron los pacientes con antecedentes de enfermedades hepatobiliares. Se obtuvo TC de abdomen con contraste en formato DICOM y se transfirió a un software informático para el análisis de imágenes. Se diseñó y validó un protocolo y luego se aplicó en la estimación de volumen utilizando el software MRIcro para la visualización de imágenes, ImageJ para la estimación de volumen y Onis 2.6 como visor de imágenes. Se reclutaron 300 voluntarios sanos. El resultado de la fiabilidad del protocolo fue 0,805. El volumen hepático medio absoluto fue 3261,32 ± 1365,313 cm3. Se detectó un volumen más elevado de hígado en las mujeres que en los hombres. Se detectó una correlación positiva entre el volumen y el índice de masa corporal (valor de p 0,001) independientemente del sexo. La relación con la edad mostró un aumento continuo y brusco hasta los 50 años, luego comenzó a disminuir de manera constante. Se detectó la relación del volumen hepático con el sexo y el índice de masa corporal. Se necesitan más estudios para investigar la relación entre la etnia y los grupos etarios.

Liver structural injury in leptin-deficient (ob/ob) mice: lipogenesis, fibrogenesis, inflammation, and apoptosis / Lesión estructural del hígado en ratones con deficiencia de leptina (ob/ob): lipogénesis, fibrogénesis, inflamación y apoptosis

SUMMARY: Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) might progress the steatosis to nonalcoholic steatohepatitis (NASH), reaching a cirrhosis state and possibly hepatocellular carcinoma. The liver of three-month-old C57BL/6J mice (wild-type, WT group, n=10) and leptin- deficient obese mice (ob/ob group, n=10) were studied, focusing on the mechanisms associated with the activation of the hepatic stellate cells (HSCs) and pro-fibrogenesis. The obese ob/ob animals' liver showed steatosis, increased lipogenesis gene expressions, inflammation, increased pro-inflammatory gene expressions, inflammatory infiltrate, and potential apoptosis linked to a high Caspase 3 expression. In ob/ob mice, liver sections were labeled in the fibrotic zones by anti-alpha-smooth muscle actin (alpha-SMA) and anti-Reelin, but not in the WT mice. Moreover, the alpha-SMA gene expression was higher in the ob/ob group's liver than the WT group. The pro-fibrogenic gene expressions were parallel to anti- alpha-SMA and anti-Reelin immunofluorescence, suggesting HSCs activation. In the ob/ob animals, there were increased gene expressions involved with lipogenesis (Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma, Cell death-inducing DFFA-like effector-c, Sterol regulatory element-binding protein-1c, and Fatty acid synthase), pro-fibrogenesis (Transforming growth factor beta1, Smad proteins- 3, Yes-associated protein-1, Protein platelet-derived growth factor receptor beta), pro-inflammation (Tumor necrosis factor-alpha, and Interleukin-6), and apoptosis (Caspase 3). In conclusion, the results in obese ob/ob animals provide a clue to the events in humans. In a translational view, controlling these targets can help mitigate the hepatic effects of human obesity and NAFLD progression to NASH.

RESUMEN: La enfermedad del hígado graso no alcohólico (HGNA) puede progresar de la esteatosis a esteatohepatitis no alcohólica (ENA), alcanzando un estado de cirrosis y posiblemente carcinoma hepatocelular. Se estudió el hígado de ratones C57BL / 6J de tres meses de edad (tipo salvaje, grupo WT, n = 10) y ratones obesos con deficiencia de leptina (grupo ob/ob, n = 10), centrándose en los mecanismos asociados con la activación de las células estrelladas hepáticas (HSC) y profibrogénesis. El hígado de los animales obesos ob/ob mostró esteatosis, aumento de la expresión génica de la lipogénesis, inflamación, aumento de la expresión génica proinflamatoria, infiltrado inflamatorio y posible apoptosis ligada a una alta expresión de Caspasa 3. En ratones ob/ob, las sec- ciones de hígado se marcaron en las zonas fibróticas con anti-alfa- actina de músculo liso (alfa-SMA) y anti-Reelin, pero no en los ratones WT. Además, la expresión del gen alfa-SMA fue mayor en el hígado del grupo ob/ob que en el grupo WT. Las expresiones génicas profibrogénicas fueron paralelas a la inmunofluorescencia anti-alfa-SMA y anti-Reelin, lo que sugiere la activación de las HSC. En los animales ob/ob, hubo un aumento de las expresiones génicas involucradas con la lipogénesis (receptor activado por proliferador de peroxisoma gamma, efector c similar a DFFA inductor de muerte celular, proteína de unión al elemento regulador de esterol-1c y sintasa de ácidos grasos), pro-fibrogénesis (factor de crecimiento transformante beta 1, proteínas Smad-3, proteína-1 asociada a Yes, receptor beta del factor de crecimiento derivado de plaquetas de proteínas), proinflamación (factor de necrosis tumoral alfa e interleucina-6) y apoptosis (caspasa 3). ). En conclusión, los resultados en animales obesos ob/ob proporcionan una pista de los eventos en humanos. Desde un punto de vista traslacional, el control de estos objetivos puede ayudar a mitigar los efectos hepáticos de la obesidad humana y la progresión de HGNA a ENA.

Anatomy of the skull of saanen goat: an anesthesiology and stereology approach / Anatomía del cráneo de la cabra saanen: un enfoque desde la anestesiología y la estereología

SUMMARY: The Saanen goat is known as the greatest milk producer among small ruminat breeds. However, its morphometric features still remain unclear. Therefore, the present work aimed to investigate the functional anatomy of the upper and lower jaws as well as the volumetric properties of the male and female Saanen goat for clinical applications. The heads of 20 adult animals (10 males and 10 females) were included. Totally, 22 morphometric parameters were measured on three dimensional computed tomographic images using RadiAnt DICOM Viewer software and some parameters were measured on hot macerated sample. The mean volume of paranasal sinuses as well as conchal sinuses were estimated using stereological method. Based on the results, the differences between males and females were not significant (p>0.05) in all desired parameters.The frontal and lacrimal sinuses were the largest and smallest paranasal sinus in both sexes. Also, the dorsal and middle conchal sinuses were the largest and smallest ones, respectively. The common nasal meatus was the smallest and ventral meatus was the largest meatus in the nasal cavity. In conclusion, these findings provide a basic data that would be useful in blocking terminal branches of the cranial nerves in this breed for surgical purpose or teeth injuries treatment.

RESUMEN: La cabra Saanen es conocida como la mayor productora de leche entre las razas de pequeños ruminos, sin embargo, sus características morfométricas aún permanecen sin revelar. Por lo tanto, el presente trabajo tuvo como objetivo investigar la anatomía de los huesos del cráneo y cara, así como sus propiedades volumétricas, en la cabra Saanen, tanto del macho como de la hembra con la finalidad de contribuir con las aplicaciones clínicas. Se incluyeron las cabezas de 20 animales adultos (10 machos y 10 hembras). Se midieron 22 parámetros morfométricos en imágenes de tomografía computarizada tridimensionales utilizando el software RadiAnt DICOM Viewer; algunos parámetros se midieron en muestra macerada en calor. El volumen medio de los senos paranasales y concales se estimó mediante método estereológico. En base a los resultados, las diferencias entre machos y hembras no fueron significativas (p> 0.05) en todos los parámetros deseados. Los senos frontal y lagrimal eran de mayor y menor volumen en ambos sexos, respectivamente. Además, los senos conchal dorsal y medio eran los más grandes y los más pequeños, respectivamente. El meato nasal común fue el más pequeño y el meato ventral el más grande en la cavidad nasal. En conclusión, estos hallazgos brindan un dato básico que sería útil en el bloqueo de las ramas terminales de los nervios craneales en esta raza, con fines quirúrgicos o tratamiento de lesiones dentales.

Effect of titanium dioxide nanoparticles on the stereological parameters of the dentate gyrus and the morphology of granular hippocampal neurons in mice / Efecto de las nanopartículas de dióxido de titanio sobre los parámetros estereológicos del giro dentado y morfología de las neuronas granulares del hipocampo en ratones

SUMMARY: This study aims to investigate the Effects of Titanium dioxide nanoparticles (TiO2 NPs) on the stereological parameters in the dentate gyrus and the morphology of granular hippocampal neurons in adult mice. Adult male mice (n=20, weight average: 45 g) were randomly divided into four groups including: group receiving saline (controls), low-dose (LD) 2.5 mg/kg TiO TiO2 NPs, medium-dose (MD) 5 mg/kg TiO2 NPs and high-dose (HD) 10 mg/kg TiO2 NPs, daily using gavage for 35 days. To estimate the volume of the hippocampus, dentate gyrus, and sub-layers of dentate gyrus the Cavalieri principle was used. The physical dissector was used to determine the numerical density of dentate gyrus granular cells. For analyzing the morphology of dentate gyrus granular cells the qualitative Golgi staining was used. Our data showed that the total volume of the hippocampus, dentate gyrus and its sublayers including molecular, granular and polymorph in TiO2 treated mice decreased significantly compared to the control group. Moreover, the total number and numerical density of dentate gyrus granular sub layer cells showed a significant reduction in all three experimental groups compared to the control group. The granular cells of the dentate gyrus had shorter dendritic length and decreased dendritic branches in the TiO2-treated in comparison with the control mice. These data can justify the disorders related to memory, learning and hippocampus neurons damages due to using of TiO2 NPs.

RESUMEN: En este estudio se analizaron los efectos de las nanopartículas de dióxido de titanio (TiO2 NP) sobre los parámetros estereológicos en el giro dentado y la morfología de las neuronas granulares del hipocampo en ratones adultos. Se dividieron aleatoriamente ratones machos adultos (n = 20, promedio de peso: 45 g) en cuatro grupos: grupo que recibió solución salina (controles), dosis baja (LD) 2,5 mg/kg NP de TiO2, dosis media (MD) 5 mg/kg de NP de TiO2 y dosis altas (HD) de 10 mg/kg de NP de TiO2, por vía utilizando sonda durante 35 días. Para estimar el volumen del hipocampo, el giro dentado y las subcapas del giro dentado se utilizó el principio de Cavalieri. Se utilizó el disector físico para determinar la densidad numérica de las células granulares del giro dentado. Para analizar la morfología de las células granulares del giro dentado se usó la tinción cualitativa de Golgi. Nuestros datos mostraron que el volumen total del hipocampo, el giro dentado y sus subcapas, incluyendo la molecular, granular y polimorfos, en ratones tratados con TiO2, disminuyó significativamente en comparación con el grupo de control. Además, el número total y la densidad numérica de las células de la subcapa granular del giro dentado mostró una reducción significativa en los tres grupos experimentales en comparación con el grupo control. Las células granulares del giro dentado tenían una longitud dendrítica menor y ramas dendríticas disminuidas en los ratones tratados con TiO2 en comparación con los ratones del grupo control. Estos datos pueden justificar los trastornos relacionados con la memoria, el aprendizaje y los daños en las neuronas del hipocampo debido al uso de NP de TiO2.

Impact of maternal exposure to wood smoke pollution on fetal lung morphology in a rat model / Impacto de la exposición materna a la contaminación por humo de leña en la morfología pulmonar fetal en un modelo de rata

SUMMARY: Residential heating with wood is an important source of ambient air pollution. Evidence links air pollution to serious health effects such as respiratory and cardiovascular mortality and morbidity. We hypothesized that prenatal exposure to wood smoke pollution causes morphological changes in the development of the rat lung, leading to altered lung structure and function during later life. We presumed that analysis of the fetal lung stereology provides novel insights into the underlying processes mediating particulate matter associated developmental changes and damage. The objective of the study was to investigate the effects of exposure during gestational period to wood smoke pollution on lung fetal morphology. To test this, pregnant rats were exposed during pregestational and gestational periods to wood smoke pollution. Complete lungs samples were obtained from 24 fetus from healthy female G3 rats subjected to cesarean at 19 days post-fecundation. The lungs were prepared for histological and stereological analysis. The volume fraction of terminal bronchioles VV [tb, lung] and volume fraction of parenchyma VV [par, lung], surface density of terminal bronchioles SV [tb, lung] as well as numerical density of bronchiolar exocrinocytes NA [ec,lung] were calculated by light microscopy. Statistical analysis detected significant differences between groups in volume density VV [tb, lung; %] (p=0.0012) and surface density SV [tb, lung; mm2/mm3] (p<0.0001) of the terminal bronchioles. However, it did not show differences between groups in the stereological parameter volume density VV [par, lung; %] (p=0.0838) and numerical density of bronchiolar exocrinocytes NA [ec,lung; nº/mm2] (p=0.0705). The analysis of the evidence obtained indicates that exposure to environmental pollution was affects lung maturation, and particularly the proportion and area of terminal bronchioles in the fetal lung. In conclusion, maternal exposure to wood smoke pollution during pregnancy was associated with a decrease in the lower conducting airways of lungs, which, according to urban pollution studies, could be related to early childhood lower respiratory illness. The public health implications of this study are that reducing or avoiding exposure to wood smoke is important before and during pregnancy.

RESUMEN: La calefacción residencial con leña es una fuente importante de contaminación ambiental. La evidencia vincula la contaminación del aire con graves efectos sobre la salud, como la mortalidad y la morbilidad respiratoria y cardiovascular. Hipotetizamos que la exposición prenatal a la contaminación por humo de leña causa cambios en el desarrollo del pulmón de rata, lo que conduce a una morfo-función pulmonar alteradas durante la vida posterior, creemos que el análisis de la estereología pulmonar fetal proporcionará nuevos conocimientos sobre los procesos subyacentes que median esos cambios. El objetivo del estudio fue investigar los efectos de la exposición prenatal a la contaminación ambiental por humo de leña sobre la morfología pulmonar fetal. Ratas preñadas fueron expuestas durante los períodos pregestacional y gestacional a la contaminación por humo de leña. En fetos de 19 días post-fecundación fue obtenido el pulmón para análisis histológico y estereológico. Fue determinado la fracción de volumen de bronquiolos terminales VV [tb, pulmón], fracción de volumen del parénquima VV [par, pulmón], densidad superficial de los bronquiolos terminales SV [tb, pulmón] así como la densidad numérica de exocrinocitos NA [ec, pulmón]. El análisis estadístico detectó diferencias significativas entre grupos en la densidad de volumen V [tb, pulmón; %] (p=0,0012) y densidad superficial SV [tb, pulmón; mm2/mm3] (p<0,0001) de los bronquiolos terminales. Sin embargo, no demostró diferencias entre grupos en la densidad de volumen VV [par, pulmón; %] (p=0,0838) y numérica de exocrinocitos bronquiolares NA [ec, pulmón; nº / mm ] (p=0,0705). El análisis de la evidencia obtenida indica que la exposición a la contaminación ambiental afectó la maduración pulmonar, y particularmente la proporción y área de bronquiolos terminales en el pulmón fetal. En conclusión, la exposición materna a la contaminación por humo de leña durante la gestación se asoció a una disminución de las vías respiratorias conductoras de aire en pulmón, lo que, según estudios de contaminación urbana, podría estar relacionado con enfermedades de las vías respiratorias inferiores en la primera infancia. Las implicaciones para la salud pública de este estudio son que reducir o evitar la exposición al humo de leña es importante previo y durante la gestación. Por otro lado, la contaminación por humo de leña tiene un gran impacto en la salud pública que, en teoría, es posible prevenir.

Exposure to wood smoke pollution during pre-gestational period of rat has effects on placenta volume and fetus size / La exposición a la contaminación por humo de leña durante el período pregestacional de la rata tiene efectos sobre el volumen de la placenta y el tamaño del feto

SUMMARY: Studies in humans showed that prenatal exposure to urban air pollution (AP) influences fetal development, and increases the incidence of adverse pregnancy outcomes and some diseases in postnatal life. However, most of these were performed in environments where the main source of environmental particulate matters (PM) emission is diesel combustion by motor vehicles and industries, thereby ignoring the effects produced by wood smoke pollution. We hypothesized that morphological changes in the placenta could contribute to the reduction in fetal size associated with different periods of exposure to AP produced by wood smoke pollution prior to and during pregnancy. The objective of the study was to investigate the quantitative effects of long-term exposure to environmental levels of wood smoke pollution on the macroscopic and microscopic morphology of the placenta in rats. To test this, pregnant rats were exposed during pregestational and gestational periods to wood smoke pollution in indoor and outdoor environments. At 19 days of gestation, the placentas were obtained by caesarean and were prepared for histological, planimetric and stereological analysis. The volume and proportions of the placental compartments were estimated. In addition, stereological estimators in fetal capillaries were calculated in the labyrinth region. Crown rump length, fetus weight and litter weight were influenced by pregestational and gestational exposure periods. Exposure to wood smoke pollution during pregestational period has significant effect on the volume of the placenta, and consequently on fetal height. In conclusion, this study demonstrated that long-term outdoor exposure to wood smoke pollution from residential heating affects fetal health, decreasing the absolute volume of the entire placenta and the placental interface between the mother and fetus, decreasing the total volume of blood vessels present in the labyrinth region ofthe placenta and affecting the size of the fetus.

RESUMEN: Estudios en humanos demostraron que la exposición prenatal a la polución del aire urbano influye en el desarrollo fetal y aumenta la incidencia de resultados adversos de la gestación y algunas enfermedades postnatales. Sin embargo, la mayoría de ellos fueron realizados en entornos donde la principal fuente de emisión de material particulado, fue la combustión de petróleo por vehículos a motor e industrias, ignorando los efectos producidos por el humo de leña producido por la calefacción intradomiciliaria. Hipotetizamos respecto a que los cambios de la placenta contribuirían a la disminución del tamaño fetal relacionado a los períodos de exposición al humo de leña durante los periodos pregestacional y gestacional. El objetivo del estudio fue investigar los efectos cuantitativos de la exposición al humo de leña sobre la morfología macroscópica y microscópica en placenta de ratas. Para probar esto, ratas preñadas fueron expuestas durante los períodos pregestacional y gestacional a la contaminación por humo de leña en ambientes interiores y exteriores. A los 19 días de gestación, las placentas fueron obtenidas por cesárea y fueron preparadas para un análisis histológico, planimétrico y estereológico. Fue estimado el volumen absoluto y las proporciones de los compartimentos placentarios. Además, fueron calculados estimadores estereológicos en capilares fetales del laberinto y trofoblasto. La longitud, el peso del feto y el peso de la camada fueron influenciados por los períodos de exposición pregestacional y gestacional. La exposición a la contaminación por humo de leñá durante el período pregestacional tuvo un efecto significativo en el volumen de la placenta y, en consecuencia, en la altura del feto. En conclusión, este estudio demostró que la exposición a largo plazo al humo de leña afecta la salud del feto, disminuyendo el volumen absoluto de la placenta, además, afecta la interfaz placentaria entre la madre y feto, disminuyendo el volumen total de vasos sanguíneos presentes en la región del laberinto placentario y por consecuente afectando el tamaño del feto.

Características morfocuantitativas de la glándula submandibular de ratón (Mus musculus) / Morphocuantitative characteristics of the mouse (Mus musculus) submandibular gland

El ratón (Mus musculus) es un buen modelo animal de experimentación, donde sus glándulas salivales han sido utilizadas en estudios, especialmente de tipo preclínico. Sin embargo, las diferencias en la morfología de estas glándulas y, en particular de las submandibulares, entre humanos y roedores no son de conocimiento común. Por lo anterior, el objetivo de este estudio fue conocer las características morfocuantitativos de la glándula submandibular del ratón macho C57BL/6. Se utilizaron cinco ratones macho, cepa C57BL/ 6, de 11 a 13 semanas de nacidos, con un peso promedio de 30 g. Luego de su ambientación, los ratones fueron eutanasiados. Para el análisis histológico, las glándulas fueron extraídas y fijadas en formalina tamponada por 48 horas, procesada para su inclusión en paraplast y teñidas con hematoxilina y eosina, azul alcián pH 2,5, ácido peryódico de Schiff y Picrosirius Red. Se determinaron las características estereológicas de densidad de longitud (LVcond), de volumen (VVcond) y de superficie (SVcond) de los conductos. En las células acinares se evaluó la densidad de número (NVcel) y la densidad de volumen (VVcel). Para cada variable se obtuvo la media ± desviación estándar. La glándula submandibular se encontraba organizada de manera lobulada, cuyo parénquima era de tipo túbuloacinar mixto con predominio seroso, que se conectaba a través de conductos. Las células acinares presentaban reacción positiva para azul alcián y ácido peryódico de Schiff. El estroma de la glándula contenía principalmente colágeno tipo 1. Los resultados de las mediciones estereológicas fueron: LVcond = 220,02 ± 50,51 mm/mm3; VVcond = 50,48 ± 9,55 %; SVcond = 26,39 ± 5,45 mm2/mm3; NVcel = 16,85 x 104 ± 9,13 × 104/mm3; VVcel = 24,98 ± 6,22 %. Con los análisis presentados es posible realizar investigaciones experimentales, considerando las similitudes y diferencias morfocuantitativas que presenta la glándula submandibular de ratón macho, cepa C57BL/6 con la del humano.

The mouse (Mus musculus) is a good experimental animal model, where murine salivary glands have been widely used in research by their similarities with human glands. Stereology is a tool that has to demonstrated to be valuable in biomedical researc h. Therefore, the objective was to realize an analogy between morphology, function and morpho-quantitative characteristics of the C57BL/6 mouse submandibular gland. Five male mice, C57BL/6, from 11 to 13 weeks old were used, with an average weight of 30 g. After seven days, the mice were euthanized and the samples were extracted. Then, these were processed following the conventional histological processing protocol and stained with H&E, Picrosirius Red, AA and PAS. Finally, the histological and stereological analysis of the samples was performed. In the glandular ducts the length density (LVcond), volume density (VVcond) and surface density (SVcond) were determined; whereas, in the acinar cells the density of number (NVcel) and the density of volume (VVcel) were evaluated. For each stereological variable the mean ± standard deviation was obtained. The histological study revealed no discrepancies as previously described. Descriptive statistical analysis revealed the following: LVcond = 220.02 ± 50.51 mm/mm3; VVcond = 50.48 ± 9.55 %; SVcond = 26.39 ± 5.45 mm2/mm3; NVcel = 168467.38 ± 91288.67 /mm3 and VVcel = 24.98 ± 6.22 %. From this study, it will be possible to conduct comparative experimental research analyzing quantitative results from those presented in this research. From this study, it will be possible to carry out comparative experimental research, analyzing quantitative results from those presented in this investigation.

Is there effect of intervertebral disc herniation on the lumbar spine in early period? A morphometric and stereological study / ¿Existe algún efecto de la hernia de disco intervertebral en la columna lumbar en el período temprano? Un estudio morfométrico y estereológico

The degeneration of the Lumbar Intervertebral Disc (LIVD) and the other elements of the spine are an inevitable result of aging. However, it is observed that the same degree of degenerative change does not occur in each individual. In the present study, the purpose was to compare the morphometric changes on the lumbar spine with or without intervertebral disc herniation in early period. Group 1 (the Patient Group) consisted of the patients who were diagnosed with lumbar intervertebral disc hernia and who were not operated at least one month clinical duration. Group 2 (the Control Group) consisted of individuals who were selected randomly, had only back pain, underwent magnetic resonance imaging (MRI), and were determined to have intact intervertebral disc. The sagittal and axial MRI sections of lumbar spine was used for measurements and statistical evaluation. There were no statistically significant differences between the intervertebral disc volumes, vertebral body volumes and intervertebral disc anterior and posterior heights of Group 1 and 2 (p>0.05). In terms of anterior-posterior length, the length of the L5 vertebral body was determined to be more in the Patient Group (p<0.05). A correlation was determined in terms of the increase in L2, L4 and L5 volumes with increasing age; however, there were no statistically significant correlations between age increase and a decrease in the intervertebral disc volumes. There were no correlations between the increase in age and the decrease in intervertebral disc heights (p>0.05). There were no apparent relations between the change on the lumbar vertebra corpus and intervertebral disc in early period. It was concluded that the intact intervertebral disc could protect the lower lumbar vertebra corpus from degenerative changes. Although the herniation of the intervertebral disc is newly formed, it is understood that the physiological process or morphometric changes started earlier.

La degeneración del disco intervertebral lumbar y de otros elementos de la columna vertebral son un resultado inevitable del envejecimiento. Sin embargo, no se observa el mismo grado de degeneración en cada individuo. En el presente estudio, el objetivo era comparar los cambios morfométricos en la columna lumbar con o sin hernia de disco intervertebral en el período temprano. El grupo 1 (grupo de pacientes) estaba formado por los pacientes diagnosticados con hernia de disco intervertebral lumbar y que no fueron operados durante al menos un mes. El Grupo 2 (Grupo de Control) consistió en sujetos que fueron seleccionados al azar, reportaban solamente dolor de espalda, fueron sometidos a una resonancia magnética (MRI) y se determinó un disco intervertebral intacto. Las secciones de resonancia magnética sagital y axial de la columna lumbar se utilizaron para las mediciones y la evaluación estadística. No hubo diferencias estadísticamente significativas entre los volúmenes del disco intervertebral, los volúmenes del cuerpo vertebral y las alturas anterior y posterior del disco intervertebral de los Grupos 1 y 2 (p> 0,05). En términos de longitud anterior-posterior, se determinó que la longitud del cuerpo vertebral L5 era mayor en el grupo de pacientes (p <0,05). Se determinó una correlación en términos del aumento en los volúmenes L2, L4 y L5 con el aumento de la edad; sin embargo, no hubo correlaciones estadísticamente significativas entre el aumento de la edad y una disminución en los volúmenes del disco intervertebral. No hubo correlaciones entre el aumento de la edad y la disminución de las alturas de los discos intervertebrales (p> 0,05). No hubo relaciones aparentes entre el cambio en el cuerpo de la vértebra lumbar y el disco intervertebral en el período temprano. Se concluyó que el disco intervertebral intacto podría proteger el cuerpo de la vértebra lumbar inferior de los cambios degenerativos. Aun cuando la formación de la hernia del disco fue reciente, se entiende que el proceso fisiológico o los cambios morfométricos habían comenzado antes.

Commentary on mitochondrial stereology in transmission electron microscopy / Comentario sobre estereología mitocondrial en microscopía electrónica de transmisión

Mitochondria (m) are responsible for the energy availability of cells, and their analysis is indicated for example, in studies related to metabolism and oxidative stress. The direct measurement of mitochondria (morphometry) is biased because of the section obliquity and position relative to the mitochondria length (non-equatorial cut). Therefore, stereology is an appropriate technique to evaluate mitochondria. However, before beginning the study, it is necessary to consider the premises to obtain random and uniform samples to be analyzed stereology. Mitochondria must have the chance to appear in all the possibilities of cut and orientation in the micrographs. The number of micrographs to be analyzed will depend on the distribution and occupation of mitochondria in the cell. After this is resolved, a proposal is the estimation of the following stereological data: volume density (Vv), surface density (Sv), and mean cross-sectional area (A). Overlapping a known test area at each micrograph, the density by area of mitochondria is estimated (NAT). Vv [m] can easily be estimated by point-counting (Vv = Pp/PT; Pp are the points hitting the structure, PT are the number of points of the test system). Sv is estimated overlaying a test-line (LT) on the micrographs and counting the intersections of the lines (I) with the outer membrane (om), inner membrane (im), and crests (c), thus, Sv [om], Sv [im], Sv [c] (Sv = 2I / LT). A [m] is obtained as the ratio: A = Vv / 2NAT.

Las mitocondrias (m) son responsables de la disponibilidad de energía de las células, y su análisis está indicado, por ejemplo, en estudios relacionados con el metabolismo y el estrés oxidativo. La medición directa de las mitocondrias (morfometría) está sesgada debido a la oblicuidad de la sección y la posición relativa a la longitud de las mitocondrias (corte no ecuatorial). Por lo tanto, la estereología es una técnica apropiada para evaluar las mitocondrias. Sin embargo, antes de comenzar el estudio, es necesario considerar las premisas para obtener muestras aleatorias y uniformes para analizar estereológicamente. Es esencial que las mitocondrias tengan la posibilidad de aparecer en todas las posibilidades de corte y orientación en las micrografías. El número de micrografías que se analizarán dependerá de la distribución y ocupación de las mitocondrias en la célula. Una vez resuelto esto, una propuesta es la estimación de los siguientes datos estereológicos: densidad de volumen (Vv), densidad de superficie (Sv) y área de sección transversal media (A). Superponiendo un área de prueba conocida en cada micrografía, se estima la densidad por área de mitocondrias (NAT). Vv [m] se puede estimar fácilmente contando puntos (Vv = Pp / PT; Pp son los puntos que llegan a la estructura, PT son el número de puntos del sistema de prueba). Sv se estima superponiendo una línea de prueba (LT) en las micrografías y contando las intersecciones de las líneas (I) con la membrana externa (om), la membrana interna (im) y las crestas (c), por lo tanto, Sv [om], Sv [im], Sv [c] (Sv = 2I / LT). A [m] se obtiene como la relación: A = Vv / 2NAT.

Pancreatic islet stereology: estimation of beta cells mass / Estereología de los islotes pancreáticos: estimación de la masa de células beta

Obesity and its comorbidities are becoming epidemic in the Western world. Beta cell mass estimation is an important indicator to track the progression of insulin resistance/type 2 diabetes, particularly in experimental studies, where it can be performed with stereological tools in an unbiased way. In this work, we present a simple protocol that can contribute to doing the practice of estimating the mass of beta cells more frequent and reproducible. As with any quantitative study, the necessary precautions regarding sampling and randomness must be respected.

La obesidad y sus comorbilidades se están convirtiendo en una epidemia en el mundo occidental. La estimación de la masa de células beta es un indicador importante para rastrear la progresión de la resistencia a la insulina/diabetes tipo 2, particularmente en estudios experimentales, donde se puede realizar con herramientas estereológicas de manera imparcial. En este trabajo presentamos un protocolo simple que puede contribuir a que la práctica de estimar la masa de células beta sea más frecuente y reproducible. Como en cualquier estudio cuantitativo, deben respetarse las precauciones necesarias con respecto al muestreo y la aleatoriedad.

The effect of intermittent fasting diet on the hippocampus of adult male mouse after inducing demyelination by ethidium bromide injection / Efecto de la dieta de ayuno intermitente en el hipocampo de ratón macho adulto después de inducir la desmielinización por inyección de bromuro de etidio

Intermittent fasting diet (IF) as a restrictive regimen prevents neural degeneration and stimulates overexpression of various neurotropic factors in the hippocampus of animal models. This study evaluates the potential effect of the IF in the prevention of learning and memory dysfunction and improving the alterations in the number and volume of neurons in an ethidium bromide (EB) induced mouse model of demyelination.Mice were randomly assigned into N group (Normal Diet and normal saline injection), F group (IF and normal saline injection), EBN group (Normal Diet and EB injection), EBF group (IF and EB injection). The hidden platform test was carried out based on path length, escape latency and swim speeds of mice. Stereological studies were determined by the Cavalieri and the Optical Dissector technique. Maintenance of mice on the IF results in significantly decreased the body weight and biochemical parameters, increased total number of neurons and volume of the hippocampus, and improved learning and memory parameters of adult male mice. However, IF in EBF group did not show as excellently as F group. The EBF group displayed significantly spatial memory improvement than that in EBN group. There were no statistically significant differences between EBF and EBN groups in stereological and learning parameters, though the EBF group displayed faster escape latencies, and swam faster and shorter path lengths than the EBN group in these parameters. Therefore as a conclusion, The IF fairly improved some adverse effects of EB in experimental demyelination models.

La dieta de ayuno intermitente (AI) como régimen restrictivo, previene la degeneración neural y la estimación de la presencia de diversos factores neurotrópicos en el hipocampo de modelos animales. Este estudio evalúa el efecto potencial de la AI en la prevención del aprendizaje y la disfunción de la memoria y mejora las alteraciones en el número y el volumen de las neuronas en un modelo de desmielinización, en ratón, inducido con bromuro de etidio (BE). Los ratones se asignaron al azar en el grupo N (dieta normal e inyección salina normal), Grupo A (AI e inyección salina normal), Grupo BEN (dieta normal e inyección BE), Grupo EBF (inyección AI y BE). La prueba de la plataforma oculta se llevó a cabo en función de la longitud del trayecto, la latencia de escape y la velocidad de nado de los ratones. Los estudios estereológicos fueron determinados por la técnica de Cavalieri y la técnica del disector óptico. En el grupo AI disminuyeron significativamente el peso corporal de los ratones, los parámetros bioquímicos, el número total de neuronas y el volumen del hipocampo, y los parámetros de aprendizaje y la memoria de los ratones machos adultos. Sin embargo, el grupo AI en BEF no se mostró tan bien como el grupo A. El grupo EBF mostró una mejora en la memoria espacial significativamente mayor que la del grupo BEN. No hubo diferencias estadísticamente significativas entre los grupos A, BE y BEN en los parámetros estereológicos y de aprendizaje, aunque el grupo EBF mostró latencias de escape más rápidas, y nado en las rutas más rápidas y más cortas que el grupo BEN en estos parámetros. Por lo tanto, como conclusión, el grupo AI mejoró bastante algunos efectos adversos de la BE en los modelos de desmielinización experimental.

Impairment induction by axotomy in motor functional and histological anterior horn of spinal cord structure / Inducción del deterioro por axotomía en la estructura motora funcional e histológica del asta anterior de la médula espinal

We have surveyed the motor changes in rats subjected to sciatic nerve axotomy. The rats were divided into two groups, each one consisting of ten animals, which underwent the following intervention: The first group (control): healthy rats without any injuries and experimental group: rats with injured sciatic nerve without treatment. at 12 weeks, the L4 and L5 spinal cord segments were removed. We evaluated nerve function using muscle electromyography (EMG) activity and sciatic function index (SFI) simultaneously with histological spinal cord analyses by stereological methods at 12 week. After nerve injury presented gross locomotor deficits at week 12. We also found that the volume of the anterior horn of spinal cord and total number of motor neurons were decreased after nerve axotomy (p<0.05). In conjunction, these results indicate that peripheral nerve injuries have more severe consequences on hind limb motor output.

En este estudio se examinaron los cambios motores en ratas sometidas a axotomía del nervio ciático. Las ratas se dividieron en dos grupos diez animales. El primer grupo (control) eran ratas sanas sin lesiones, y el grupo experimental consistió en ratas con nervio ciático lesionado sin tratamiento. A las 12 semanas, los segmentos de la médula espinal L4 y L5 fueron removidos. Se evaluó la función nerviosa mediante electromiografía muscular (EMG) y el índice de función ciática (IFC), simultáneamente con análisis histológicos de la médula espinal mediante métodos estereológicos. A las 12 semanas de la lesión nerviosa presentó déficit locomotor grueso. Además, se observó que el volumen del asta anterior y el número total de neuronas motoras disminuyeron después de la axotomía nerviosa (P <0,05). En conjunto, estos resultados indican que las lesiones de los nervios periféricos determinan graves consecuencias de la función motora de los miembros posteriores.

The effect of 1-methyl-4-phenyl-1, 2, 3, 6-tetrahydropyridine (MPTP) on mice myocardial morphology / O efeito do 1-metil-4-fenil-1, 2, 3, 6 tetrahidropiridina (MPTP) na morfologia do miocárdio de camundongo

Studies have demonstrated sympathetic cardiac denervation in the MPTP mouse model. MPTP toxicity causes sympathetic nerve damage and depletion of heart norepinephrine. Previous evaluations of impairments in heart innervation have been based on imaging, electrophysiological and biochemical methods. However, these studies lacked information that can be obtained from morphoquantitative analyses. Thus, this study aimed to apply a design-based stereological method for evaluating the morphoquantitative alterations of myocardium following treatment with the neurotoxin MPTP in the C57/BL mouse. Our results showed that MPTP reduced the number of cardiomyocytes in the left ventricle.(AU)

Estudos têm demonstrado a desnervação simpática cardíaca no modelo da administração do MPTP em camundongo. A toxicidade do MPTP causa lesão ao nervo simpático e depleção da norepinefrina. As avaliações dos danos na inervação do coração são baseadas em métodos de imagem, eletrofisiológico e bioquímico. Contudo, estes estudos carecem de informações provenientes de análises morfoquantitativas. Assim, objetivou-se aplicar métodos estereológicos para avaliar as alterações morfoquantitativas do miocárdio após o tratamento com a neurotoxina MPTP no camundongo C57/BL. Nossos resultados mostraram que o MPTP causa redução no número de cardiomiócitos no ventrículo esquerdo.(AU)

Effects of repeated exposure to different concentrations of sevoflurane on the neonatal mouse hippocampus / Efeitos da exposição repetida a diferentes concentrações de sevoflurano sobre o hipocampo de ratos neonatos

Abstract Background and objectives: Developing brain is more vulnerable to environmental risk than is the developed brain. We evaluated the effects of repeated exposure to different concentrations of sevoflurane on the neonatal mouse hippocampus using stereological methods. Methods: Eighteen neonatal male mice were randomly divided into three groups. Group A, inhaled sevoflurane at a concentration of 1.5%; Group B, inhaled sevoflurane at a concentration of 3%; and Group C (control group), inhaled only 100% oxygen. Treatments were applied for 30 min a day for 7 consecutive days. The hippocampal volume, dendrite length, number of neurons, and number of glial cells were evaluated in each group using stereological estimations. Results: We identified a ∼2% reduction in the volume of the hippocampus in Group A compared to Group C. Mean hippocampal volume was ∼11% smaller in Group B than it was in Group C. However, these differences in hippocampal volume between the groups were not statistically significant (p > 0.05 for all). As for the number of neurons, we found significantly fewer neurons in Group A (∼29% less) and Group B (∼43% less) than we did in Group C (p < 0.05 for both). The dendrite length was ∼8% shorter in Group A and ∼11% shorter in Group B than it was in Group C. Conclusions: Repeated exposure to sevoflurane, regardless of the concentration, reduced the volume of the neonatal mouse hippocampus, as well as the number of neurons and dendrite length.

Resumo Justificativa e objetivos: O cérebro em desenvolvimento é mais vulnerável ao risco ambiental do que o cérebro já desenvolvido. Avaliamos os efeitos da exposição repetida a diferentes concentrações de sevoflurano sobre o hipocampo de ratos neonatos com o uso de métodos estereológicos. Métodos: Dezoito ratos neonatos foram divididos aleatoriamente em três grupos. O Grupo A foi submetido à inalação de sevoflurano a uma concentração de 1,5%; o Grupo B foi submetido à inalação de sevoflurano a uma concentração de 3%; o Grupo C (controle) foi submetido à inalação de apenas oxigênio a 100%. Os tratamentos foram aplicados durante 30 minutos por dia, durante sete dias consecutivos. Volume do hipocampo, comprimento do dendrito, número de neurônios e número de células gliais foram avaliados em cada grupo com o uso de estimativas estereológicas. Resultados: Identificamos uma redução de ∼2% no volume do hipocampo no Grupo A em comparação com o Grupo C. O volume médio do hipocampo foi ∼11% menor no Grupo B do que no Grupo C. Entretanto, essas diferenças no volume do hipocampo entre os grupos não foram estatisticamente significativas (p > 0,05 para todos). Quanto ao número de neurônios, encontramos um número significativamente menor de neurônios no Grupo A (∼29% menos) e no Grupo B (∼43% menos) do que no Grupo C (p < 0,05 para ambos). O comprimento do dendrito foi ∼8% menor no Grupo A e ∼1% menor no Grupo B que no Grupo C. Conclusões: A exposição repetida ao sevoflurano, independentemente da concentração, reduziu o volume do hipocampo neonatal de camundongos, bem como o número de neurônios e o comprimento dos dendritos.

Kidney anatomy, histology and histometric traits associated to renosomatic index in Gymnotus inaequilabiatus (Gymnotiformes: Gymnotidae)

The Gymnotus inaequilabiatus is a Neotropical fish widely distributed in marginal areas of bays. The aim of this study was to describe the main histological and histopathological traits in the head and exocrine kidney. Here, histometric and structural density techniques were associated with renosomatic index (RSI). The kidney was processed for light microscopy. Lipofuscin and hemosiderin content were visually estimated in the melonomacrophages centers (MMCs). All the biometric body variables were correlated with RSI, especially the kidney weight and gross lesions count. The general architecture of head and exocrine kidney was similar to that described for other teleost species. MMCs were prevalent in both portions and correlated with RSI in the head and exocrine kidney. Granulomatous structures were often observed in both portions; however, they were associated only in the exocrine kidney with RSI. Of all the structures hystometrically estimated, only proximal tubular diameter and thickness, and distal tubular thickness were correlated to renosomatic index. The RSI is an useful biometric variable that represent some physiological and morphological characteristics of kidney in G. inaequilabiatus. These findings may be used in future studies to evaluate the effects of environmental stressors on the renal adaptative physiological process.(AU)

Gymnotus inaequilabiatus é um peixe neotropical amplamente distribuído em áreas marginais de baías. O objetivo deste estudo foi descrever características anatômicas, histológicas e histopatológicas no rim cefálico e exócrino. Análises histométricas e a densidade volumétrica estrutural foram associadas ao índice renossomático (IRS). Fragmentos de ambos tecidos foram processados para análise e microscopia de campo claro. O conteúdo de lipofuscina e hemossiderina foi estimado visualmente nos centros de melanomacrófagos (CMMs). Todas as variáveis corporais biométricas foram correlacionadas com o IRS, principalmente o peso renal e a contagem de lesões superficiais. A arquitetura geral do rim cefálico e exócrino foi semelhante à descrita para outras espécies de teleósteos. Os CMMs foram frequentes em ambas as porções e correlacionaram-se com o IRS. Estruturas granulomatosas foram frequentemente observadas em ambas porções; no entanto, foram associadas ao IRS apenas no rim exócrino. De todas as estruturas estimadas histometricamente, apenas o diâmetro e espessura dos túbulos proximais e distais correlacionaram-se ao IRS. Este índice mostrou-se uma variável útil associada a características fisiológicas e morfológicas do rim de G. inaequilabiatus. Esses achados podem ser empregados em futuros estudos a fim de avaliar efeitos ambientais bem como processos adaptativos fisiológicos.(AU)

Color-based segmentation vs. stereology: a simple comparison between two semi-automated methods of image analysis for the quantification of collagen / Segmentación basada en colores vs. estereología: una comparación simple entre dos métodos semiautomáticos de análisis de imágenes para la cuantificación del colágeno

Image processing techniques are being widely developed for helping specialists in analysis of histological images and its application is especially useful in obtaining numerical data for the realization of the subsequent statistical analysis. The use of these methods makes the histological analysis of experts more objective and less time-consuming. In this paper we evaluate how well the quantitative methods - color-based image segmentation and stereology - agree on average, and how well they agree for the individuals when they are used to quantify type I and III collagen. Digital images of sections of Salmo salar jaws (5 µm, SiriusRed staining) were analyzed. Collagen quantification was performed by two methods in the same group of images: i) Color Based-Segmentation (K-means algorithm; pixel cluster; ImageJ32 v1.51p) and ii) Stereology (VV; M36; STEPanizer Stereological Tools). They were evaluated 200 images per group. The difference between groups and concordance was analyzed using t-Student (p<0.05) and Blant Altman Comparison Method, respectively. The data analysis of average and individual assessments showed that there is concordance between two methods. In conclusion, stereology and color-based image segmentation are powerful tools which quantify collagen in histological sections.

Las técnicas de procesamiento de imágenes han sido ampliamente desarrolladas para ayudar a los especialistas en el análisis de imágenes histológicas y su aplicación es especialmente útil para obtener datos numéricos para la realización del posterior análisis estadístico. El uso de estos métodos hace que el análisis histológico realizado por expertos sea más objetivo. En este estudio evaluamos qué tan bien coinciden o concuerdan en promedio y entre evaluaciones individuales los métodos cuantitativos "segmentación basada en color" y la "estereología" cuando son utilizados para cuantificar el colágeno tipo I y III. Se analizó imágenes digitales de tejido mandibular de Salmo salar (5 µm, tinción SiriusRed). La cuantificación del colágeno se realizó mediante dos métodos en el mismo grupo de imágenes: i) Segmentación basada en color (algoritmo K-mean, cluster de píxeles, ImageJ32 v1.51p) y ii) Estereología (VV; M36; STEPanizer Stereological Tools). Fueron evaluados 200 imágenes por grupo. Se analizó la diferencia de medias y concordancia entre métodos mediante t-Students (p>0,05) y el Método de Comparación de Blant-Altman. El análisis de los datos de las evaluaciones promedio e individuales demostró que hay concordancia entre los dos métodos. En conclusión, la estereología y la segmentación de imágenes basadas en color son poderosas herramientas útiles para cuantificar colágeno en secciones histológicas.

La estimulación táctil/kinestésica revierte los efectos del estrés prenatal en la región CA3 del hipocampo en ratas hembras: estudio estereológico / Tactile/kinesthetic stimulation reverses the effects of prenatal stress in the CA3 region of the hippocampus in female rats: a stereological study

Esta investigación fue realizada para saber si la estimulación táctil/kinestésica postnatal es efectiva en revertir el estrés prenatal, en la citoarquitectura de CA3 del hipocampo, en crías hembras. 12 crías de ratas hembras de la cepa Sprague-Dawley, fueron distribuidas en Grupo Control (GC), Grupo con Estrés Prenatal por restricción (EP) y Grupo Estrés prenatal con Estimulación Táctil/Kinestésica postnatal (EP-ETK). El estrés prenatal en crías hembras aumentó la densidad neuronal en las áreas CA3b y CA3c (p<0,001). Cuando se compararon las crías con estrés prenatal con las que recibieron estimulación táctil/kinestésica temprana, disminuyeron las densidades neuronales en las áreas CA3b y CA3c, (p < 0,001). La estimulación táctil/kinestésica postnatal logró revertir los efectos del estrés prenatal, al reducir la densidad neuronal en las áreas CA3b y CA3c del hipocampo.

This investigation was undertaken in order to know whether the postnatal tactile/kinesthetic stimulation is effective in reversing the Prenatal Stress, in the cytoarchitecture of the CA3 region of the hippocampus, in female pups. 12 pups of female rats from the Sprague-Dawley strain were distributed to Control Group (GC), the Prenatal Maternal Stress by restriction group (EP) and Prenatal Maternal Stress with postnatal tactile/ kinesthetic stimulation Group (EP-ETK). The Prenatal Maternal Stress in female pups increased neuronal density in CA3b and CA3c areas (p<0.001). When compared to Prenatal Maternal Stress, pups prenatal stress who received early tactile/kinesthetic stimulation showed a decrease in neuronal density in CA3b and CA3c areas (p < 0,001). Postnatal tactile/kinesthetic stimulation was shown to successfully reverse the Prenatal Maternal Stress effects by decreasing neuronal density in CA3b and CA3c hippocampal areas.